免疫组库(Immune Repertoire,IR)是指在指定时间,某个体循环系统中所有功能的多样性T细胞和B细胞的总和。在T细胞和B细胞中发现的受体分别被称为T细胞受体(T Cell Receptor,TCR)和B细胞受体(B Cell Receptor,BCR),细胞发育过程中存在复杂的V(D)J重排机制,导致TCR/BCR基因序列多样性极为丰富。
在单细胞水平同时检测转录组基因表达和免疫组库多样性,不但可以了解TCR和BCR克隆型,还可以联合转录组数据深入挖掘免疫机理,为免疫组学研究提供更高效的工具。
一、天工巧夺:技术原理
1、简介
新格元sCircle®单细胞全长免疫受体(TCR/BCR)建库试剂盒(sCircle® Single Cell Full Length Immuno-TCR/BCR Library Kit)基于Singleron单细胞平台,利用GEXSCOPE®微流控芯片捕获单细胞,通过反转录获得cDNA,cDNA分别用于转录组文库构建和全长免疫组库富集。
转录组文库构建
cDNA经片段化、连接接头等步骤后构建测序文库,获得3'端单细胞转录组文库。
全长免疫组库富集
首先将cDNA环化处理,将环化cDNA序列线性化,同时将序列中最为重要的V(D)J序列进行方向转化,富集之后获得全长V(D)J序列。
二、聚焦优势:高长全多
2、全长V(D)J捕获:可拼接获得免疫受体全长信息,对V(D)J基因序列进行组装和注释,获得单个免疫细胞克隆型配对序列信息,进而全面获取全长免疫组库多样性信息。
3、同时获得每个免疫细胞免疫受体全长信息和3’端单细胞转录谱信息。
4、多元化应用场景,适配人源和鼠源免疫细胞。
5、可基于单细胞全长V(D)J序列构建系统发育树。
三、实力展示:数据说话
l小鼠脾脏全长TCR数据
使用新格元全长免疫组库(TCR)建库试剂对小鼠脾脏样本测序,全长TCR测序数据与单细胞转录组数匹配之后可映射至T细胞群上,各项指标均可满足后续分析。
TCR信息可以与单细胞图谱细胞相互映射:
四、应用领域:刻画免疫
通过免疫组库研究,结合高通量测序技术,可全面评估免疫系统中免疫细胞克隆型丰度和多样性。目前免疫组库测序可应用于肿瘤治疗、抗体研发、自身免疫性疾病、移植和免疫重建和用药及疫苗评估等多个领域。
1、肿瘤治疗-免疫微环境:免疫组库可揭示浸润T细胞的克隆多样性,发现起关键免疫作用的T细胞亚型,捕捉肿瘤发生时的免疫微环境变化,有利于寻找免疫治疗靶点,提高免疫治疗疗效。
2、抗体开发:利用免疫组库可以获得特征性的序列,大辐度缩短抗体开发的流程和时间。
3、自身免疫性疾病:利用免疫组库技术可根据T细胞的克隆增殖情况,发现并分析异常表达的免疫细胞,寻找临床诊断标志物,为疾病的治疗提供依据。
4、移植和免疫重建:免疫组库技术可检测移植后T细胞库,根据T细胞的克隆增殖情况,发现起主要免疫作用的T细胞亚型,也可识别移植后感染或复发的高危人群。
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