3.scRNA-seq揭示TME中抗肿瘤T细胞的单细胞表达谱
为了更深入地了解rVSV-LCMVG如何影响肿瘤特异性和病毒特异性T细胞的分化过程,作者在各种体内治疗后对这些T细胞进行了单细胞转录组测序(scRNA-seq)分析,特别关注从B16-OVA移植的C57BL/6J小鼠获得的肿瘤特异性OT-I T细胞。然后,根据这些T细胞的特征将其分为十大类:early activated T cells, Xcl1+ T cells, Il7r+ Tem cells, Nme1+ T cells, ISG+ Teff cells, Tcf7+ Tex cells, Gzmb+ Teff cells, S phase Tex cells, Temra cells, and G2m phase Tex cells(图3a)。没有rVSV-LCMVG刺激的OT-I T细胞主要在耗竭的T细胞簇(G2m期Tex、S期Tex和Tcf7+Tex)中发现。然而,当TME被rVSV-LCMVG重塑时,OT-I T细胞主要属于效应T细胞簇,包括早期活化的T细胞、ISG+Teff细胞、Temra细胞和Il7r+Tem细胞(图3b)。此外,OT-I细胞在用联合OVs处理后表现出Runx3的表达升高。这表明这些OT-I细胞可能在肿瘤组织中持续很长时间,从而发挥抗肿瘤作用(图3c)。接下来,作者进一步验证了rVSV-LCMVG处理显著干扰的亚群的差异表达基因模式。G2M期Tex表达典型耗竭相关基因(Pdcd1、Ung、Mcm2、Ccnb2和Top2a)。Tcf7+Tex耗竭性T细胞的增殖祖细胞。表达Nme1、Ccr7和Nmm1的Nme1+T细胞与Tcf7+Tex细胞高度连接。根据Stat1、Isg15、Ifit3和Gzmb的表达对ISG+效应T细胞进行进一步分类。Il7r+Tem高度表达记忆T细胞(Il7r、Zfp36l2、Gpr183、Cxcr4和Sell)的特征。总之,rVSV-LCMVG给药使得肿瘤组织中浸润的特异性T细胞构成发生变化,其中效应细胞(Teff)和记忆细胞(Tmem)比例明显增多,Tex比例则相对下降(图3d,e)。
在分析病毒特异性T细胞时,作者观察到所有样本都可以分为13个不同的簇。这些簇包括早期活化的T细胞、G2m期Tex细胞、Gzmb+Teff细胞、Il7r+Tem细胞、ISG+Teff细胞、ISG+Bystander细胞、Naïve样T细胞、Nme1+T细胞、S期Tex细胞、调节因子样CD8细胞、Tcf7+Tex细胞,Xcl1+T细胞和终末Tem细胞。(图4a,b)。与OVs结合,P14病毒特异性T细胞从幼稚T细胞分化为Teff和Tmem细胞。相反,肿瘤特异性T细胞经历从Tex到Teff和Tmem细胞的分化(图4c)。这些结果表明,肿瘤特异性T细胞的过继转移单独导致它们在肿瘤浸润时分化为衰竭和受损的T细胞。然而,当肿瘤特异性T细胞与溶瘤病毒rVSV-LCMVG联合使用时,它们有效地重塑了肿瘤浸润T细胞亚群的构成并提高了其抗肿瘤能力。
图3 scRNA-seq揭示TME中抗肿瘤T细胞的单细胞表达谱
图4 scRNA-seq揭示OT-I和P14细胞的单细胞表达谱
4.mRNA癌症疫苗联合溶瘤病毒可提高治疗效果
为了提供更具有转化价值的联合治疗,研究团队将溶瘤病毒rVSV-LCMVG与mRNA癌症疫苗进行联合治疗,溶瘤病毒与mRNA癌症疫苗的联合应用同样显示出肿瘤负荷的显著降低和生存期的延长。
图5 mRNA癌症疫苗联合溶瘤病毒可提高治疗效果